Wéi bestëmmen déi optimal Konzentratioun?
Fir den Induktor IPTG (Isopropyl-Beta-d-Thiogalactoside), wat méi héich d'Konzentratioun ass, desto besser.Déi optimal Konzentratioun hänkt vun de spezifesche experimentellen Bedéngungen an dem gewënschten Induktiounseffekt of.
Allgemeng gëtt d'Konzentratioun vun IPTG am Beräich vun 0,1-1 mM benotzt.Méi niddereg Konzentratioune kënnen negativ Auswierkungen op Zellwachstum reduzéieren a kënnen Zytotoxizitéit reduzéieren wéinst Iwwerexpressioun vun Zilproteine.Méi héich Konzentratioune kënnen exzessiv Zellmetabolesch Belaaschtung verursaachen, Zellwachstum an Ausdrockseffizienz beaflossen.
De Wee fir déi optimal Konzentratioun ze bestëmmen kann sinn den Ausdrockniveau vum Zilprotein ze evaluéieren andeems Dir IPTG Induktiounstester a verschiddene Konzentratioune mécht.Kleng-Skala Kultur Tester kann mat enger Rei vun IPTG Konzentratioune gesuergt ginn (zB 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) an den Ausdrock Effekt op verschiddene Konzentratioune kann évaluéieren vun der Ausdrock Niveau vun der Zil- Protein z'entdecken (zB Western Blot oder Fluoreszenz Detektioun).Laut den experimentellen Resultater gouf d'Konzentratioun mat dem beschten Ausdrockseffekt als optimal Konzentratioun ausgewielt.
Zousätzlech kënnt Dir och op déi relevant Literatur oder d'Erfahrung vun anere Laboratoiren referenzéieren fir déi allgemeng benotzt IPTG Konzentratiounsberäich ënner ähnlechen experimentellen Bedéngungen ze verstoen, an dann no den experimentellen Bedierfnesser optimiséieren an unzepassen.
Et ass wichteg ze bemierken datt déi optimal Konzentratioun ofhängeg vu verschiddenen Ausdrocksystemer, Zilproteinen an experimentellen Bedéngungen variéiere kann, also ass et am beschten op Fall zu Fall ze optimiséieren.
Post Zäit: Sep-28-2023