4-Nitrophenyl-Beta-D-Galactopyranosid CAS: 200422-18-0

Effekt: ONPG ass e Substrat, dat speziell benotzt gëtt fir d'Präsenz an d'Aktivitéit vum Enzym β-Galaktosidase ze detektéieren. Wann den Enzym β-Galaktosidase präsent an aktiv ass, spléckt en ONPG an zwee Produkter: o-Nitrophenol an en Galaktosederivat. D'Fräisetzung vun o-Nitrophenol féiert zu enger gieler Faarfännerung, déi mat engem Spektrophotometer gemooss ka ginn.

Uwendung: ONPG huet verschidde Uwendungen an der Molekularbiologie a Biochemiefuerschung:

Bestëmmung vun der β-Galactosidase-Aktivitéit: ONPG gëtt dacks benotzt fir d'Aktivitéit vum β-Galactosidase-Enzym ze moossen an ze quantifizéieren. D'Bildungsquote vun o-Nitrophenol, déi direkt proportional zu der Enzymaktivitéit ass, kann spektrophotometresch gemooss ginn.

Genexpression a Reguléierung: ONPG gëtt dacks an Experimenter am Zesummenhang mat Genexpression a Reguléierungsstudien agesat. Et gëtt dacks a Fusiounsproteinassays benotzt, wéi zum Beispill dem übleche lacZ-Fusiounssystem, fir d'Expressioun vu Genen ënner der Kontroll vu spezifesche Promoteuren ze studéieren. D'Beta-Galactosidaseaktivitéit, déi mat ONPG gemooss gëtt, gëtt Abléck an den Niveau vun der Genexpression.

Screening op β-Galactosidase-Aktivitéit: ONPG kann als kolorimetresch Screeningmethod an der rekombinanter DNA-Technologie benotzt ginn, fir d'Präsenz an d'Funktionalitéit vum LacZ-Gen z'identifizéieren, dat fir β-Galactosidase kodéiert. Dës Screeningmethod hëlleft bei der Identifikatioun vu Klonen, déi dat interessant Gen enthalen.

Enzymkinetikstudien: ONPG ass och nëtzlech fir d'Kinetik vum β-Galactosidase-Enzym ze studéieren. Duerch d'Miessung vun der Geschwindegkeet vun der Enzym-Substrat-Reaktioun bei verschiddene Substratkonzentratioune ass et méiglech, kinetesch Parameter wéi d'Michaelis-Menten-Konstanten (Km) a maximal Reaktiounsgeschwindegkeeten (Vmax) ze bestëmmen.