Dithiothreitol (DTT) ass en allgemeng benotzte Reduzéierungsmëttel, och bekannt als den neie gréngen Additiv.Et ass eng kleng molekulare organesch Verbindung mat zwou Mercaptangruppen (-SH).Wéinst senge reduzéierende Eegeschaften a Stabilitéit gëtt DTT wäit an der Biochemie a Molekularebiologie Experimenter benotzt.
D'Haaptroll vun DTT ass Disulfidbindungen a Proteinen an aner Biomolekülen ze reduzéieren.D'Disulfidbindung ass e wichtege Bestanddeel vun der Proteinfolding a Stabilitéit, awer ënner bestëmmten experimentellen Bedéngungen, sou wéi reduzéierbar SDS-PAGE Analyse, Proteinrekombinatioun a Klappung, ass et néideg fir d'Disulfidbindung op zwou Thiolgruppen ze reduzéieren fir d'raimlech Struktur vun der de Protein.DTT kann mat Disulfidbindungen reagéieren fir se op Mercaptangruppen ze reduzéieren, sou datt d'raimlech Struktur vum Protein opmaacht an et einfach ze analyséieren an ze manipuléieren ass.
DTT kann och benotzt ginn fir Enzymaktivitéit a Stabilitéit ze schützen.A verschiddenen Enzym-katalyséierte Reaktiounen kann d'Aktivitéit vum Enzym vum Oxidant reduzéiert ginn.DTT kann mat Oxidanten reagéieren fir se op harmlos Substanzen ze reduzéieren, doduerch d'Aktivitéit an d'Stabilitéit vum Enzym ze schützen.
Am Verglach mat traditionelle Reduktiounsmëttel wéi β-Mercaptoethanol (β-ME), gëtt DTT als e méi sécher a méi stabil Reduktiounsmëttel ugesinn.Et ass net nëmmen stabil an der wässerlecher Léisung, awer behält och seng Reduzéierungseigenschaften ënner héijen Temperaturen a Säurebasisbedingungen.
D'Benotzung vun DTT ass relativ einfach.Am Allgemengen gëtt DTT an engem passenden Puffer opgeléist an dann an den experimentellen System bäigefüügt.Déi optimal Konzentratioun vun DTT muss no dem spezifesche Experiment bestëmmt ginn, a gëtt allgemeng am Beräich vun 0,1-1mM benotzt.Méi niddereg Konzentratioune kënnen negativ Auswierkungen op Zellwachstum reduzéieren a kënnen Zytotoxizitéit reduzéieren wéinst Iwwerexpressioun vun Zilproteine.Méi héich Konzentratioune kënnen exzessiv Zellmetabolesch Belaaschtung verursaachen, Zellwachstum an Ausdrockseffizienz beaflossen.
De Wee fir déi optimal Konzentratioun ze bestëmmen kann sinn den Ausdrockniveau vum Zilprotein ze evaluéieren andeems Dir IPTG Induktiounstester a verschiddene Konzentratioune mécht.Kleng-Skala Kultur Tester kann mat enger Rei vun IPTG Konzentratioune gesuergt ginn (zB 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) an den Ausdrock Effekt op verschiddene Konzentratioune kann évaluéieren vun der Ausdrock Niveau vun der Zil- Protein z'entdecken (zB Western Blot oder Fluoreszenz Detektioun).Laut den experimentellen Resultater gouf d'Konzentratioun mat dem beschten Ausdrockseffekt als optimal Konzentratioun ausgewielt.
Zousätzlech kënnt Dir och op déi relevant Literatur oder d'Erfahrung vun anere Laboratoiren referenzéieren fir déi allgemeng benotzt IPTG Konzentratiounsberäich ënner ähnlechen experimentellen Bedéngungen ze verstoen, an dann no den experimentellen Bedierfnesser optimiséieren an unzepassen.
Et ass wichteg ze bemierken datt déi optimal Konzentratioun ofhängeg vu verschiddenen Ausdrocksystemer, Zilproteinen an experimentellen Bedéngungen variéiere kann, also ass et am beschten op Fall zu Fall ze optimiséieren.
Zesummegefaasst ass DTT en allgemeng benotzte Reduzéierungsmëttel dee benotzt ka ginn fir Disulfidbindungen a Proteinen an aner Biomoleküle ze reduzéieren an Enzymaktivitéit a Stabilitéit ze schützen.Et gouf wäit an der Biochemie a molekulare Biologie Experimenter benotzt.
Post Zäit: Sep-28-2023