Et gi vill onbekannt Helden ronderëm eis, déi schéngen normal ze sinn, awer a Wierklechkeet droen se roueg vill zu eis bäi. Proteinase K ass den "bekannten Held" an der molekularer Diagnostikindustrie, obwuel am Verglach mat de "groussen a mächtegen" an der Industrie Proteinase K sou onopfälleg ass, datt mir hir Wichtegkeet laang iwwersinn hunn. Mam Ausbroch vun der neier Krounepidemie ass d'Nofro fir Proteinase K an d'Luucht gaangen, an d'Offer am In- an Ausland ass wäit hannert dem Konsum, an jidderee huet op eemol gemierkt, datt Proteinase K sou wichteg ass.
Wat ass d'Benotzung vu Proteinase K?
Proteinase K ass eng Serinprotease mat proteolytescher Enzymaktivitéit a kann hir Aktivitéit an enger breeder Palette vun Ëmfeld behalen (pH (4-12,5), Puffer mat héijem Salzgehalt, héijer Temperatur vun 70°C, etc.). Zousätzlech gëtt d'Aktivitéit vun der Proteinase K net duerch SDS, Harnstoff, EDTA, Guanidinhydrochlorid, Guanidinisothiocyanat, etc. inhibéiert, an eng gewëssen Quantitéit un Detergent kann och d'Aktivitéit vun der Proteinase K erhéijen. An der medizinescher Behandlung (Virus- a mikrobieller Desinfektioun), Liewensmëttel (Fleeschmëllung), Lieder (Hoerweichmachung), Wäibau (Alkoholklärung), Aminosaiervirbereedung (ofgebaute Fiederen), Nukleinsäureextraktioun, In-situ-Hybridiséierung, etc., gëtt et Uwendungen fir d'Proteinase K. Déi heefegst benotzt Uwendung ass d'Nukleinsäureextraktioun.
Proteinase K kann all Zorte vu Proteinen an der Prouf enzymalyséieren, dorënner och déi Histonen, déi enk un Nukleinsäuren gebonne sinn, sou datt d'Nukleinsäuren aus der Prouf fräigesat kënne ginn an an den Extrakt fräigesat kënne ginn, wat den nächste Schrëtt vun der Extraktioun an der Purifikatioun erliichtert. Beim Noweis vu viraler Nukleinsäure ass Proteinase K eng vun de wichtege Komponenten an der Virusprobenentnahmeléisung. Proteinase K kann d'Hüllprotein vum Virus knacken an inaktivéieren, wat méi sécher ass während der Transport- an Noweisphase; zousätzlech kann Proteinase K och RNase ofbauen, wat den Ofbau vu viraler RNA verhënnert an d'Noweis vun Nukleinsäuren erliichtert.
De Ruff vun der Proteinase K iwwer Nuecht
Egal ob am Beräich vun der wëssenschaftlecher Fuerschung oder am Beräich vun der intravenöser Diagnostik (IVD), d'Extraktioun vun Nukleinsäure ass dat elementarst Experiment, dofir war d'Proteinase K ëmmer eng ganz wichteg Existenz. Fréier war d'Proteinase K awer vill manner bekannt wéi hir Roll. E groussen Deel dovunner war well d'Bezéiung tëscht Offer a Nofro fir d'Proteinase K ganz stabil war. Wéineg Leit géifen mengen, datt d'Versuergung mat der Proteinase K e Problem wier.
Mam Ausbroch vun der neier Krounepidemie ass d'Nofro fir Nukleinsäuretester staark eropgaang. Enn Juni 2020 huet China bal 90 Millioune nei Krounentester ofgeschloss, an dës Zuel ass weltwäit nach méi alarméierend. Bei Nukleinsäureextraktiounsexperimenter ass d'Aarbechtskonzentratioun vu Proteinase K ongeféier 50-200 μg/mL. Am Allgemengen brauch een ongeféier 100 μg Proteinase K fir eng Prouf vun Nukleinsäure ze extrahéieren. Am tatsächlechen Asaz gëtt Proteinase K dacks a méi grousser Quantitéit benotzt fir d'Effizienz vun der Nukleinsäureextraktioun ze erhéijen. D'Detektioun vun Nukleinsäure beim neie Coronavirus huet eng grouss Nofro fir Proteinase K mat sech bruecht. Dat ursprénglecht Gläichgewiicht tëscht Ubidder a Nofro fir Proteinase K gouf séier gebrach, an d'Proteinase K ass iwwer Nuecht zu engem wichtege Material fir d'Préventioun vun Epidemie ginn.
Schwieregkeeten bei der Produktioun vu Proteinase K
Och wann de Wäert vun der Proteinase K mat der Entwécklung vun der Epidemie vun de Leit geschätzt gouf, ass et peinlech, datt wéinst dem exzessive niddrege Wäert vun der Proteinase K nëmme wéineg inlännesch Firmen un der Produktioun vu Proteinase K bedeelegt waren. Wéi d'Leit d'Produktioun vu Proteinase K etabléiere wollten. Wärend dem Produktiounsprozess gouf festgestallt, datt Proteinase K e ganz speziellt Protein ass. Et ass extrem schwéier, d'Produktiounskapazitéit vu Proteinase K a kuerzer Zäit auszebauen.
Déi grouss Produktioun vu Proteinase K steet virun de folgende Schwieregkeeten:
1. Niddreg Ausdrock
Proteinase K kann déi meescht Proteinen net spezifesch ofbauen an eng eescht Toxizitéit fir d'Expressiounswirtszell verursaachen. Dofir ass den Expressiounsniveau vu Proteinase K am Allgemengen ganz niddreg. De Screening vun Expressiounssystemer a Stämm, déi Proteinase K staark expriméieren, erfuerdert am Allgemengen e méi laange Zyklus.
2. Reschter vu Pigmenter an Nukleinsäuren
Groussskaleg Fermentatioun bréngt eng grouss Quantitéit u Pigment a Wirtsnukleinsäurereschter mat sech. Et ass schwéier, dës Ongereinheeten mat engem einfache Reinigungsprozess ze entfernen, an eng komplex Reinigung erhéicht d'Käschten an reduzéiert d'Réckgewinnungsquote.
3. Instabilitéit
D'Proteinase K ass net stabil genuch, si kann sech selwer enzymalyséieren, an et ass schwéier, se laangfristeg stabil bei 37°C ouni e Schutzmëttel ze späicheren.
4. Einfach ze fällen
Bei der Virbereedung vum gefriergedréchenten Pulver vun der Proteinase K, fir sécherzestellen, datt de Feststoffgehalt vun der Proteinase K am gefriergedréchenten Pulver grouss ass, ass et néideg, e gefriergedréchent Schutzmëttel an enger héijer Konzentratioun bäizefügen, awer wann d'Konzentratioun vun der Proteinase K 20 mg/ml a méi erreecht, ass et einfach, datt sech e Nidderschlag bildt, wat grouss Schwieregkeeten beim Gefrierdréchnen vun der Proteinase K mat engem héije Feststoffgehalt mat sech bréngt.
5. Grouss Investitioun
Proteinase K huet eng staark Proteaseaktivitéit a kann aner Proteasen am Laboratoire hydrolyséieren. Dofir erfuerdert Proteinase K spezialiséiert Produktiounsberäicher, Ausrüstung a Personal fir Fuerschung, Entwécklung a Produktioun.
XD BIOCHEM seng Proteinase K Léisung
XD BIOCHEM huet eng ausgereift Plattform fir Proteinexpressioun a -reinigung a verfügt iwwer räich Erfahrung an der Expressioun a Reinigung vu rekombinante Proteinen an der Optimiséierung vu Produktiounsprozesser. Duerch déi séier Bildung vun engem Fuerschungs- an Entwécklungsteam gouf de groussskalege Produktiounsprozess vu Proteinase K iwwerwonne. Déi monatlech Produktioun vu gefriergedréchentem Pulver ass méi wéi 30 KG. D'Produkt huet eng stabil Leeschtung, eng héich enzymspezifesch Aktivitéit a keng Cytochrom- a Nukleinsäurereschter vum Wirt. Wëllkomm bei XD BIOCHEM. Kritt en Testpaket (E-Mail:sales@xdbiochem.comTel.: +86 513 81163739).
D'technesch Léisunge vun XD BIOCHEM ëmfaassen
Mat Hëllef vun der Multi-Kopie-Plasmid-Integratioun ginn héichexpressionsräich Stämm mat engem Expressiounsniveau vun 8g/L ausgewielt, wat de Problem vum niddregen Expressiounsniveau vun der Proteinase K iwwerwënnt.
Duerch d'Aféierung vun engem Méistuf-Reinigungsprozess goufen d'Cytochrom- an d'Nukleinsäurereschter vum Wirt vun der Proteinase K erfollegräich ënner dem Standardwäert ewechgeholl.
Duerch en High-Throughput-Screening vu Schutzpufferformuléierungen gouf e Puffer ausgewielt, deen d'Proteinase K stabil bei 37°C späichere kann.
Screeningpuffer léist de Problem, datt d'Proteinase K bei héije Konzentratioune liicht aggregéiert a präzipitéiert, a leet d'Grondlag fir d'Gefriertrocknung vun der Proteinase K mat héijem Feststoffgehalt.
XD BIOCHEM Proteinase K Prouf
XD BIOCHEM Proteinase K Stabilitéitstest: et gëtt keng bedeitend Ännerung vun der Aktivitéit no 80 Deeg bei Raumtemperatur
XD BIOCHEM Proteinase K Stabilitéitstest: et gëtt keng bedeitend Ännerung vun der Aktivitéit no 80 Deeg bei Raumtemperatur.
Vergläich vum Nukleinsäure-Extraktiounseffekt vun der XD BIOCHEM Proteinase K a Konkurrenzprodukter. Am Prozess vun der Nukleinsäure-Extraktioun ginn XD BIOCHEM respektiv kompetitiv Proteinase K benotzt. D'Extraktiounseffizienz vun der XD BIOCHEM Proteinase K ass méi héich an de Ct-Wäert vum Zilgen ass méi niddreg.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 31. Dezember 2021